مقاله اندازه گیری هورمون رشد در ادرار گاو با میکرواستخراج قطره ای حباب

کمی سازی سطح پیکوگرم برخی از هورمونهای رشد در ادرار گاو با استفاده از میکرواستخراج قطره ای حباب در قطره ترکیب شده با حلال

چکیده

هورمون رشد مهم ترکیبات فعال بیولوژیکی هستند. با این حال، آنها می توانند سبب اثرات زیان بار شود اگر با دقت استفاده نشود و استفاده از آنها در حیوانات پرورشی در اتحادیه اروپا ممنوع است. مطالعه حاضر به توسعه و استفاده از روش میکرواستخراج قطره ای حباب در قطره ترکیب شده با حلال (BID-SDME) برای غنی سازی هورمون استیلبن در نمونه های ادرار گاو می پردازد. هورمون ها با استفاده از دستگاه GC-MS به صورت خطی با ضریب تعیین (R2) از 0.999 و 0.999 برای hexestrol و دی اتیل استیل بسترول، در محدوده غلظت 0.05-10 NGML-1، کمی سازی شد. دقت عالی (RSD<10٪) و دقت (با استفاده از یک ادرار مرجع گاو) به دست آمد. ارزش قابلیت تشخیص مشاهده (CCα یا LOD) 0.01 نانوگرم در میلی لیتر (هگزاسترول)، 0.03 نانوگرم در میلی-لیتر (سیس دی اتیل استیل بسترول) و 0.02 نانوگرم در میلی لیتر (ترانس دی اتیل استیل بسترول)، بود در حالی که ارزشهای حد تصمیم (CCβ یا LOQ)0.03 نانوگرم در میلی لیتر و 0.07 و 0.08نانوگرم در میلی لیتر، بود که قابل مقایسه با یا بهتر از آنچه در مقالات گزارش شده بودند. نکته مهم، دستکاری نمونه است به طور قابل توجهی با استفاده از روش ما ساده شده و ارزش های غنی سازی تا حد زیادی افزایش یافته است. نتایج نشان میدهد که یک مخلوط 3:1 کلروفرم / تولوئن بالاترین بازده استخراج با نسبت کاهش حباب از 2: 1 داد. ما اهمیت تراکم حلال را در موفقیت روش BID-SDME برجسته کردیم.

مقدمه

در حالی که هورمون به طور طبیعی شکل می گیرد، برخی از انواع مصنوعی در طیف وسیعی از برنامه های کاربردی استفاده می شود. برنامه های کاربردی هورمون رشد عبارتند از استفاده بالینی آن در کودکان با ثبت رشد ضعیف در دام، برای مثال برای پرواربندی، بهبود باروری و در ورزش به عنوان افزایش دهنده عملکرد می باشد. دو بررسی جامع از استفاده، تنظیم و نظارت بر هورمون ها در شبکه غذایی با مرور بسیار عالی از چالش و برخی از راه حل برای این مشکلات ارائه شد.

تجزیه و تحلیل هورمونهای اگزوژن در شبکه های غذایی مهم است زیرا آنها می توانند تهدید جدی برای مصرف کنندگان باشند. بعنوان مثال، برخی هورمونها می توانند باعث چاقی و یا نازایی شوند، در حالی که برخی دیگر سرطان زا هستند. ماتریسهایی که در مطالعات مربوط به تجزیه و تحلیل هورمون استفاده شده است شامل ادرار، پلاسمای خون، مو، آب، ترشحات پوست، مدفوع و طیف گسترده ای از مواد خوراکی هست. تجزیه و تحلیل هورمون در ادرار حیوانات یک رویکرد غیر تهاجمی است ازاینرو حیوان تحت تاثیر تنش قرار نمی گیرد وقتی از آن خون کشیده می شود و ادرار در مزرعه و یا در کشتارگاه به راحتی در دسترس است. این مهم است که به بررسی محتوای هورمون رشد قبل از وارد شدن محصولات گوشت به بازار آزاد برای جلوگیری از تلفات ناشی از عدم پذیرش گوشت با سطوح غیر قابل قبولی بالا از هورمون صورت بگیرد. به طور مفید، سطح هورمون در ادرار از گوشت خیلی بالاتر است، در نتیجه یک منبع متمرکز آن مشخص شده است. بنابراین آزمایش ادرار حیوانات یک فرصت ارزشمند برای ارزیابی سطح هورمون رشد در یک حیوان معین برای زمان بندی بهینه سازی شده و دوز هورمون می باشد. در حوزه های قضایی استفاده از هورمون در حیوانات پرورشی ممنوع است، که در اتحادیه اروپا برای مثال، چنین آزمایشی سطح انطباق را نشان می دهد. تکنیک های آماده سازی نمونه برای تجزیه و تحلیل هورمون با استفاده از کروماتوگرافی شامل یک سیستم سوئیچینگ ستونی با نمونه یکپارچه پاک شده برای کروماتوگرافی مایع است.

...

نتیجه گیری

به طور خلاصه ، اینکار مزایای استفاده از سیستمهای ترکیبی حلال را در مقایسه با حلالهای به طور مداوم خالص (کلروفورم یا تولوئن) وقتی که از روش BID SDME برای استخراج آنالیز انواع خاصی هورمونهای بکار رفته در دامپروی نشان می دهد. سیستم حلال ترکیبی بازیابی HEX و DES (دو ایزومر) از نمونه های مختلف آبی را شامل نمونه ادرار گاو و ماده مرجع گواهی شده، نشان داد. این روش به طور سازگار، دقت خوب ، تکرارپذیری و صحت (RSD<10%) و خطی بودن عالی را نشان داد (R2=0.999). آن منطبق و حتی فراتر از روش های موجود عمل می کند و به طور قابل توجهی دستکاری نمونه را کاهش می دهد.

...